作用機制:
潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。
抗性基因:
對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)的基因。至今發(fā)現(xiàn)兩種來源:
► Streptomyces hygroscopicus產(chǎn)生的Hph抗性基因;
► Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae內(nèi)質(zhì)粒攜帶的Hph抗性基因(常用);
生物應用:
1) 篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞);
2) 由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細胞株;
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抗生素 | 抗性機制 | 抗性基因 | 哺乳動物篩選濃度 |
潮霉素B | 干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀 | Hph | 200~500μg/mL |
G418 | 干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成 | Tn5/Tn601 | 100~1000μg/mL |
Zeocin | 摻入或者切割DNA引起細胞死亡 | Sh ble | 50~100μg/mL |
blasticidin S | 核糖體上抑制肽鍵形成 | Bsd/BSD | 3~50μg/mL |
3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4)作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料;
應用濃度:
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,最佳濃度需要殺滅曲線來確定。
哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000 μg/mL;
產(chǎn)品使用:
使用一:殺滅曲線確定最佳殺死濃度(僅作參考,因個人檢測體系而異)
(1)往組織培養(yǎng)級的96孔板內(nèi)加入未轉(zhuǎn)染細胞,細胞密度約50-200細胞/孔;細胞貼壁之后,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個濃度)潮霉素B的200μL新鮮培養(yǎng)基;
(2)37℃,5% CO2培養(yǎng)箱孵育細胞10-14天;
(3)培養(yǎng)5-7天后更換新的培養(yǎng)液,培養(yǎng)液內(nèi)含有相應濃度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用細胞增殖方法如MTT,CCK-8等評估細胞活力;也可以通過檢測細胞克隆數(shù)或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的最小濃度為最佳篩選濃度。
使用二:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞
(1) 對于貼壁細胞,直接吸去60mm培養(yǎng)皿內(nèi)的轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)基,然后加入含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基5-6ml;對于懸浮細胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)基,然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(2) 5-7天后,如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(3) 再孵育細胞5-7天;
(4) 10-14天孵育后,培養(yǎng)體系中只含有能夠表達潮霉素B抗性表型的活細胞。因此篩選之后如步驟一,更換不含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基。
8272BN PerpHecT ROSS Sure-Flow pH 電極PerpHecT pH電極是最精確,質(zhì)量的pH電極,比常規(guī)pH電極的測量精度及的更高。當與PerpHecT儀表連用時可實現(xiàn)其性能。PerpHecT 儀表使用專利LogR™ 技術(shù),無需單獨使用ATC溫度補償電極即可進行溫度補償,使pH測量更精確。
PerpHecT ROSS Sure-Flow pH 獨有的暢通的液接界設(shè)計使其不僅適用于一般pH測量,在測量粘稠樣品及膠體是也能展示及性能。測量間隔,只需按壓電極帽末端讓電極填充液流出即可方便清洗液接界。
推薦使用: 適合污水,土壤溶液,固體浸出液,淤泥,膠體溶液等易堵塞的樣品pH 測量。
所有PerpHecT® pH電極均為BNC接口,電纜線長1m,電極帽直徑16mm。PerpHecT LogRTM 儀表需與PerpHecT 或PerpHecT ROSS pH電極連用,使用其他電極將影響測量精度與度。
技術(shù)規(guī)格
pH 測量范圍: | 0-14 |
溫度測量范圍: | 0-100°C |
參比結(jié)構(gòu): | ROSS |
液接界: | Sure-Flow |
電極尺寸: | 120 x 12 mm |
斜率: | 92 - 102% |
溫度精度 : | ± 0.5°C |
AirChek2000個體空氣采樣泵
AirChek2000采樣泵
可編程的電子流量控制,可達3250ml/minAirChek2000其專利化的內(nèi)置流量感應器,可對空氣采樣進行電子流量控制,此獨特的技術(shù)使用戶能通過應用三鍵鍵盤或裝有DataTrac 2000軟件的PC機來編制預期流速的程序,精確度可達±5%;無需其它工具。此內(nèi)置氣流傳感器直接測量流量并作為二級基準穩(wěn)定保持所設(shè)定的流速,用戶通過外接的一級基準自動校準流速(見CalChek 原文10頁)。啟動后,通過內(nèi)置傳感器,立即達到設(shè)定流速并可自動調(diào)整因不同溫度和大氣壓影響所導致的變化。電池組一次充電可保證AirChek2000采樣8小時以上,易于編程。
AirChek2000采樣泵有兩種簡便的編程選擇來滿足用戶采樣需求。·手動三鍵編程三鍵位于泵的表面。通過簡單的鍵盤操作來設(shè)定采樣時間、流速和其它信息如校準、采樣等。不需其它附件調(diào)校流速。密碼保護設(shè)定防止設(shè)定因偶然因素發(fā)生改變,并且保持采樣有效。一旦按下按鈕,液晶屏上立即顯示相應采樣參數(shù)。·PC編程提供最佳的空氣采樣程序,使用電腦和DataTrac2000軟件,可將AirChek2000采樣泵的采樣功能得到最大發(fā)揮:建立完全的運行序列,向PC機下載數(shù)據(jù),生成暴露和校準數(shù)據(jù)報告。
AirChek2000技術(shù)指標:
AirChek2000是大部分采樣應用的最佳選擇;5-500ml/min低流量采樣要求一個低流量轉(zhuǎn)接器工具包。(低流量不包括一些電子讀出器選擇?)·保護數(shù)據(jù)的安全系統(tǒng)安全密碼使偶然性改變降至最低限度并保持采樣有效·持續(xù)的采樣體積計算所有的采樣參數(shù)都持續(xù)更新,按下按鈕即可獲得·易于讀取的大液晶屏顯示:氣流故障,溫度,電池狀態(tài),日期與時間,運行時間,大氣壓,體積,流速·實時時鐘顯示12小時標準時間或24小時軍事時間·先進的電子流量控制內(nèi)置氣流傳感器直接測量流量并作為二級基準保持所設(shè)定的流速內(nèi)置傳感器自動調(diào)整因不同溫度和大氣壓所導致的流速影響·多管采樣特點選擇性多樣可調(diào)低流量夾具與穩(wěn)壓控制器一起使用時,允許同時2-,3-,4-管采樣·重量輕:22盎司·結(jié)實的外包裝設(shè)計RFI/EMI-外蓋防電磁干擾,防沖擊設(shè)計,防水設(shè)計·CalChek-直接聯(lián)絡(luò)一級基準無需手動調(diào)校
AirChek2000采樣泵自動化特征:·當電池電量或流量下降5%或更多時自動關(guān)閉·當使用PC機和DataTrac 2000 軟件時,具有從5秒到4分鐘調(diào)節(jié)時間的流量故障關(guān)閉功能 ·出現(xiàn)流量故障每5分鐘嘗試恢復(最多10次)(可由軟件設(shè)定)時自動重新啟動 ·實時數(shù)據(jù)儲存于記憶中
AirChek2000優(yōu)點:·內(nèi)置傳感器自動調(diào)整因不同溫度和大氣壓所導致影響以保持流速穩(wěn)定 ·安全密碼使偶然性改變降至最低限度并保持采樣有效·數(shù)據(jù)鏈接電纜保證采樣數(shù)據(jù)完整 ·鍵盤按鈕大,保證了哪怕在戴手套時也有足夠的空間來快速、可靠地進行設(shè)定
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技術(shù)參數(shù)一覽表
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控制器/測量系統(tǒng)
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投影儀附件 |
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ELISA的操作要點的試劑,良好的儀器和正確的操作是ELISA檢測結(jié)果的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點。
兔子脫氫表雄酮硫酸酯價格,兔子DHEA-S,北京兔ELISA Kit :Elisa試劑盒安全性:1.避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。北京方程生物提醒您: Elisa試劑盒請遠離兒童
Stbl3感受態(tài)細胞
Stbl3 chemically competent cell
編號 | 名稱 | 規(guī)格 |
WR0621-100 | Stbl3感受態(tài)細胞 | 20×100μl |
Stbl3感受態(tài)細胞產(chǎn)品規(guī)格
Stbl3: 20×100μl
保存條件: -80℃
Stbl3感受態(tài)細胞基因型
F- glnV44 recA13 mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 xyl-5 leu mtl-1
Stbl3感受態(tài)細胞產(chǎn)品說明
Stbl3感受態(tài)細胞來源于 HB101 E. coli strain,是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株,可有效抑制長片段末端重復區(qū)的重組,降低低錯誤重組的概率。經(jīng)pUC19檢測轉(zhuǎn)化效率108 cfu/μg DNA。
Stbl3感受態(tài)細胞操作方法
1. 取100μl冰上融化的Stbl3感受態(tài)細胞,加入目的DNA并用指尖輕輕撥打管底混勻(避免用槍吸打),冰上靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
Stbl3感受態(tài)細胞使用注意事項
1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。
2. 混入目的DNA時應輕柔操作。
3. Stbl3細胞生長速度快 8-10小時可見克隆。
4. 若用氨芐抗生素篩選,應使用含100 mg/ml ampicillin的平板。